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              血管內支架薄截面顯微試樣的制備
              發布時間:2016-12-19 16:31:25

                           血管內支架薄截面顯微試樣的制備

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                  支架是用一種鎳鈦合金制造的。對于不同的支架設計、材料、表面涂層,正確的制備技術將會增強對細胞組織對臨床安裝支架(特別是在細胞組織與支架的界面處)的反應。此外,它還可以對擴展特性進行周密的評估。這種觀察甚至能導致研制出經過改進的支架設計。

              為此我們將我們的全部制備經驗進行詳盡介紹。

              試樣制備步驟

              1. 切除安裝有支架的動脈,用鹽水沖洗并浸入鹽水中固定兩小時。

              2. 取薄切片之前先將安裝有支架的動脈進行鑲嵌。EpoThin?,是一個非常好的選擇,收縮率最小,在取薄切片的過程中不會使鑲嵌材料發生軟化,一種低粘度環氧樹脂。

              3. 在用精密切割機進行切割前,先用600號(P1200)和120號(P2500)CarbiMet?碳化硅砂紙,在MetaServ? 2000型磨光/拋光機或類似的設備上將鑲嵌好的試樣端面磨光。

              4. 用接觸粘合劑將磨光表面粘接在承物玻璃片上。用 perspex (一種介電有機玻璃) 做的承物片對鑲嵌截面可提供比普通承物玻璃片更大的粘合力。不過,用 600號(P1200)CarbiMet? 碳化硅砂紙對普通承物玻璃片進行預磨光也能改善其粘合性能。

              5. 選擇一種能使切割損耗最小的切割片進行切割。粘接了立方氮化硼的 IsoCut? 型薄切割片能夠在每15 mm 的支架上能再現地切割出28至30個截面。

              6. 將經過鑲嵌的試樣裝在 IsoMet? 型精密切割機上夾住。從試樣承物玻璃片一端截取50 至100μm 厚的截面。

              7. 重復步驟3和4,制備下一個截面的表面。重復這一過程并將陸續得到的截面分別粘接在承物玻璃片上。

              8. 用一系列的CarbiMet? SiC砂紙磨光,先從320號 (P400) 砂紙開始,接著使用360號 (P500)、400號(P800)、600號(P1200)、1200號(P2500)砂紙,將每個截面磨光至厚度為10–20 μm。磨光時要仔細,避免使材料去除過快和不均勻,這樣固定在砂紙紙基上的SiC磨料顆粒不至于嵌入試樣中的細胞組織部分。

              9. 用3 μm 的 UltraPrep? A 型金剛石研磨薄膜進行拋光,然后就可以進行顯微觀察。

               

              自動化制備設備/特殊夾具

              用手工方法磨薄截面試樣也容易將試樣磨偏,試樣應當磨光至5 μm 并且厚度均勻。表面和厚度不均勻的截面試樣不能為組織化學分析提供最佳的條件。為了避免這樣的問題發生,可以使用組織學精密磨光夾具 (產品編號60-8087) 具有用碳化物做的止動裝置。夾具適用的承物玻璃片尺寸為27 x 46mm。

              大多數半自動磨光/拋光機再加上巖相學和組織學用的薄截面承物片夾持器 (產品編號69-158)并使用單獨加載方式,就可以使磨光過程自動化。

              專家建議

                  在此,建議使用便攜式BioThin?型薄截面切割裝置(產品編號38- 2100)用來切割厚度為5μm的截面。這個全封閉系統使用滾珠軸承來控制所施加力的大小和承物片的定位。對于染色前的最終減薄,建議使用磨料尺寸為3μm 的 UltraPrep? A 型金剛石研磨薄膜。

              設備*

              Cast N’ Vac 型真空澆注系統

              IsoMet? 系列線性精密切割機

              MetaServ? 2000型磨光/拋光機

               


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